本发明涉及动物病原菌诊断技术领域,具体涉及一种用于创伤弧菌的LAMP-LFD检测方法,尤其涉及一套用于检测创伤弧菌外膜蛋白核苷酸序列的引物和探针。所述引物包括TolC-F3:5’-TCTTGAAGCCACTTATCGC-3’,TolC-B3:5’-CAGCATCAACATCCAGTACA-3’,TolC-FIP:5’ –TACCAACATCAAAGCCCGCTTttttCGTGCGTATGAGCAATCT-3’,TolC-BIP:5’-GATGCCACTCGTCGCCTTttttGCAGTACACTCAAGATGTAGTT-3’,TolC-LF:5’-GGTTGCTTCTAATGCTGAACG-3’,TolC-LB: 5’-AACCTATCGAATGCACGCT-3’。 TolC-FIP的5’端为生物素标记;所述探针序列为TolC-HP:5’-GGTACTCGTACTATTGTGGAT-3’,5’端为异硫氰酸荧光素标记。利用上述的引物和探针,通过LAMP反应体系扩增步骤,探针杂交LAMP反应产物步骤,使用LFD检测步骤实现创伤弧菌的检测,完成整个检测仅需80 min。本发明与常规PCR技术相比,灵敏度更高,省时省力,对仪器设备依赖性小等优势,更加适用于基层机构和现场疫源地检测。
所在地:宁波市 江北区
应用海洋生物技术教育部重点实验室
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